Rotavirus-infectie

Rotavirus-infectie of intestinale / maaggriep is een besmettelijke ziekte met symptomatische behandeling. Rotavirus-infectie komt het meest voor bij kinderen.

Rotavirus-infectie vormt een bijzonder gevaar voor kinderen, aangezien de meeste infecties in deze specifieke populatie voorkomen.

Causatieve agent van rotavirus-infectie

De infectie wordt veroorzaakt door rotavirussen - virussen van de familie Reoviridae, die qua antigene samenstelling op elkaar lijken.

Bron van infectie

De bron van infectie is een ziek persoon. De meest gevaarlijke in termen van transmissie van infectie is de patiënt in de eerste 3-5 dagen van klinische manifestaties van rotavirusinfectie, omdat gedurende deze periode het virusgehalte in de uitgescheiden uitwerpselen het grootst is.

Transmissie mechanisme

Het belangrijkste mechanisme voor overdracht van het virus is fecaal-oraal, minder vaak - de contact-huishoudelijke route van voortplanting door de overdracht van rotavirus met geïnfecteerde objecten. Vooral gevaarlijk in dit opzicht zijn zuivelproducten. Lage temperaturen vernietigen het virus meestal niet, dus het opslaan van voedsel in de koelkast kan de ontwikkeling van een rotavirusinfectie niet voorkomen.

Periode van epidemische rotavirus-infectie

Het uitbreken van de ziekte vindt plaats in de herfst-winterperiode, maar in andere seizoenen kunnen er ook gevallen zijn van het optreden van de ziekte. In de regel gaat de verspreiding en het optreden van kenmerkende symptomen van rotavirusinfectie gepaard met het optreden van een griepepidemie, daarom zijn mensen besmet met rotavirus, beter bekend als "darmgriep."

pathogenese

Na het binnengaan van het menselijk lichaam komt het virus de cellen van het slijmvlies van de dunne darm binnen, wat de vernietiging van de villi van de darm veroorzaakt. De synthese van specifieke enzymen, evenals de schending van de secretoire functie van het darmslijmvlies, leidt tot ernstige diarree en uitdroging van het lichaam als gevolg van de grote hoeveelheid elektrolyten en water dat het darmlumen binnendringt.

Symptomen van rotavirus-infectie:

• verstopte neus;
• keelpijn;
• hoesten;
• buikpijn;
• misselijkheid, braken, diarree;
• hoofdpijn, koorts.

kliniek:

De belangrijkste periodes van rotavirus-infectie:

• de incubatieperiode duurt 1-2 dagen;
• acute periode duurt 3-7 dagen;
• herstel duurt 4-5 dagen.

De ziekte wordt gekenmerkt door een acuut begin, maar de aanwezigheid van een prodromale periode is mogelijk (ongeveer 2 dagen). Kan ongesteldheid, algemene zwakte, hoofdpijn, verhoogde vermoeidheid, verlies van eetlust, onaangename sensaties en gerommel in de maag veroorzaken. Bovendien is de ontwikkeling van manifestaties van de ziekte door de bovenste luchtwegen mogelijk: verstopte neus, keelpijn, gemakkelijk hoesten.

Het algemene klinische beeld omvat de syndromen van intoxicatie, gastro-enteritis en laesies van de bovenste luchtwegen.

Manifestaties van gastro-enteritis syndroom omvatten: luid gerommel in de buik, pijn, meestal aan de top van de buik, misselijkheid, braken, diarree. Diarree met rotavirusinfectie heeft een waterige schuimachtige consistentie en is geel of groenachtig geel van kleur.

Manifestaties van intoxicatiesyndroom: vermoeidheid, zwakte, hoofdpijn. In ernstige gevallen: duizeligheid, flauwvallen.

De nederlaag van de bovenste luchtwegen wordt gekenmerkt door een loopneus, verstopte neus, keelpijn, hoest. Zev wanneer het een felle rode kleur heeft.

Complicaties en mortaliteit

Ernstige vormen van de ziekte, vergezeld van ernstige uitdroging, worden gekenmerkt door de ontwikkeling van cardiovasculaire insufficiëntie, zelfs de dood (in 2-3% van de gevallen). Na de infectie wordt een onstabiele immuniteit geproduceerd die na verloop van tijd verzwakt, dus herinfectie is mogelijk.

Diagnose van rotavirus-infectie

Diagnose van rotavirus-infectie is alleen mogelijk wanneer rotavirus wordt gedetecteerd bij mensen met behulp van laboratoriumdiagnostische methoden zoals PCR-polymerasekettingreactie, RPHA-passieve hemagglutineringsreactie, CSC-complementbinding, immunofluorescentie en vele andere.

Volledige bloedtelling toont leukocytose met een neutrofiele linker shift, verhoogde ESR - in de acute periode. Voor de herstelperiode wordt gekenmerkt door normalisatie van het bloedbeeld. Urinalyse zal eiwit-, leukocyten- en rode bloedcellen, hyaliene cilinders in kleine hoeveelheden laten zien.

Rotavirus-infectie - behandeling van darmgriep bij volwassenen en kinderen

De behandeling is symptomatisch, omdat er geen specifieke antirotavirusgeneesmiddelen zijn om het rotavirus te bestrijden.

Beginselen van behandeling van rotavirus-infectie:

1. Isolatie van een patiënt met rotavirusinfectie
2. Bestrijding van uitdroging. Het is wenselijk hiervoor speciale zoutoplossingen te gebruiken, bijvoorbeeld rehydron, zoutoplossing. Ze worden gebruikt bij de behandeling van de patiënt in het ziekenhuis, maar zoutoplossing om de normale zuur-basistoestand van het lichaam te herstellen, kan thuis worden bereid: 1 theelepel tot 1 liter water. Het wordt aanbevolen om veel mineraalwater te drinken.
3. De strijd tegen de temperatuur moet beginnen bij een temperatuur van 38, 5 en hoger. Tegelijkertijd is het, afhankelijk van het type koorts, noodzakelijk om fysieke methoden te gebruiken om de temperatuur te verlagen, bijvoorbeeld door het lichaam met water te wrijven, en chemicaliën - specifieke medicijnen in te nemen, bij kinderen is het beter om kaarsen te gebruiken.
4. Aanvaarding van enzympreparaten, adsorberende en samentrekkende middelen (actieve kool, polysorb), melkzuurbacteriepreparaten.
5. Het is verboden pijnstillers te nemen voor pijn in de buik.

Indicaties voor verwijzing naar ziekenhuis voor rotavirus-infectie:

• progressieve achteruitgang, langdurige diarree;
• de opkomst van nieuwe symptomen.

Dieet voor rotavirus-infectie:

Dieet omvat het vermijden van melk en zuivelproducten, inclusief zuivelproducten. Het is raadzaam om in het dieet kippenbouillon of rijstepap op te nemen, gekookt in water zonder toevoeging van olie. Het is noodzakelijk om in kleine porties te eten met pauzes. Het wordt aanbevolen om de voedselinname die rijk is aan koolhydraten te beperken.

Preventie van rotavirus-infectie

Belangrijke preventieve maatregelen voor rotavirus-infectie zijn onder meer:

• Voorkomen dat het virus het lichaam binnendringt, inclusief het isoleren van de zieke, reguliere handenwassen, het eten van bewezen en hoogwaardige producten, met behulp van gedistilleerd water, het wassen van groenten en fruit;
• sanitaire controle van cateringfaciliteiten en producten in winkels, markten.

Lees de voorwaarden van de gebruikersovereenkomst voordat u de informatie gebruikt die door de site medportal.org wordt verstrekt.

Gebruikersovereenkomst

De site medportal.org biedt services die voldoen aan de voorwaarden die in dit document worden beschreven. Door de website te gebruiken, bevestigt u dat u de voorwaarden van deze gebruikersovereenkomst hebt gelezen voordat u de site gebruikt en dat u alle voorwaarden van deze overeenkomst volledig accepteert. Gebruik alstublieft de website niet als u niet akkoord gaat met deze voorwaarden.

Servicebeschrijving

Alle informatie op de site is alleen ter referentie, informatie afkomstig van openbare bronnen is referentie en is geen reclame. De site medportal.org biedt diensten waarmee de gebruiker kan zoeken naar medicijnen in de gegevens die zijn verkregen van apotheken als onderdeel van een overeenkomst tussen apotheken en medportal.org. Voor het gebruiksgemak van de sitegegevens over geneesmiddelen worden voedingssupplementen gesystematiseerd en in één spelling omgezet.

De site medportal.org biedt diensten waarmee de gebruiker naar klinieken en andere medische informatie kan zoeken.

beperking van aansprakelijkheid

Informatie die in de zoekresultaten wordt geplaatst, is geen openbare aanbieding. Beheer van de site medportal.org biedt geen garantie voor de nauwkeurigheid, volledigheid en (of) relevantie van de weergegeven gegevens. Beheer van de site medportal.org is niet verantwoordelijk voor de schade of schade die u mogelijk heeft ondervonden door de toegang of het onvermogen om toegang te krijgen tot de site of het gebruik of de onmogelijkheid om deze site te gebruiken.

Door de voorwaarden van deze overeenkomst te accepteren, begrijpt u volledig en gaat u ermee akkoord dat:

Informatie op de site is alleen ter referentie.

Beheer van de site medportal.org kan niet garanderen dat er geen fouten en discrepanties zijn met betrekking tot de gedeclareerde op de site en de daadwerkelijke beschikbaarheid van goederen en prijzen voor goederen in de apotheek.

De gebruiker verbindt zich ertoe om de informatie van belang te verduidelijken door een telefoontje naar de apotheek of de informatie te gebruiken naar eigen goeddunken.

Beheer van de site medportal.org biedt geen garantie voor het ontbreken van fouten en discrepanties met betrekking tot het werkschema van klinieken, hun contactgegevens - telefoonnummers en adressen.

Noch medportal.org site, noch enige andere partij die betrokken is bij het proces van het verstrekken van de informatie is niet aansprakelijk voor letsel of schade die u kunt lijden aan het feit dat vertrouwen op de informatie op deze website.

De administratie van de site medportal.org verbindt zich ertoe en verbindt zich ertoe verdere inspanningen te leveren om discrepanties en fouten in de verstrekte informatie tot een minimum te beperken.

Beheer van de site medportal.org garandeert niet de afwezigheid van technische storingen, inclusief met betrekking tot de werking van de software. De administratie van de site medportal.org verbindt zich ertoe zo snel mogelijk alles in het werk te stellen om eventuele fouten en fouten te voorkomen in het geval dat deze zich voordoen.

De gebruiker wordt gewaarschuwd dat de administratie van de site medportal.org niet verantwoordelijk is voor het bezoeken en gebruiken van externe bronnen, waarnaar links op de site mogelijk zijn, geen goedkeuring geeft voor hun inhoud en niet verantwoordelijk is voor hun beschikbaarheid.

Het beheer van de site medportal.org behoudt zich het recht voor om de site op te schorten, de inhoud gedeeltelijk of volledig te wijzigen om wijzigingen aan te brengen in de gebruikersovereenkomst. Dergelijke wijzigingen worden uitsluitend ter beoordeling van de administratie aangebracht zonder voorafgaande kennisgeving aan de gebruiker.

U erkent dat u de voorwaarden van deze Gebruikersovereenkomst hebt gelezen en alle bepalingen van deze Overeenkomst volledig accepteert.

Adverterende informatie over welke plaatsing op de site is er een overeenkomstige overeenkomst met de adverteerder, is gemarkeerd als "als reclame."

Rotavirus-infectie

Rotavirus-infectie (rotavirus gastro-enteritis) is een acute infectieziekte veroorzaakt door rotavirussen, gekenmerkt door symptomen van algemene intoxicatie en schade aan het maagdarmkanaal bij de ontwikkeling van gastro-enteritis.

ICD-10-code
A08.0. Rotavirus enteritis.

Etiologie (oorzaken) van rotavirus-infectie

De veroorzaker is een lid van de familie Reoviridae, een geslacht van Rotavirus (rotavirus). De naam is gebaseerd op de morfologische gelijkenis van rotavirussen met een wiel (van het Latijnse "rota" - "wiel"). Onder een elektronenmicroscoop zien virale deeltjes eruit als wielen met een brede naaf, korte spaken en een duidelijk gedefinieerde dunne rand. Een rotavirus-virion met een diameter van 65-75 nm bestaat uit een elektronendicht centrum (kern) en twee peptideshells: een buitenste en een binnenste capside. De 38-40 nm kern bevat interne eiwitten en genetisch materiaal voorgesteld door dubbelstrengig RNA. Het genoom van rotavirussen bij mensen en dieren bestaat uit 11 fragmenten, wat waarschijnlijk de reden is voor de antigene diversiteit van rotavirussen. Replicatie van rotavirussen in het menselijk lichaam vindt uitsluitend plaats in de epitheelcellen van de dunne darm.

Rotavirus-infectie, weergave in elektronenmicroscoop

Vier hoofdantigenen werden gevonden in rotavirus; de belangrijkste is het groepantigeen, het eiwit van de interne capside. Rekening houdend met alle groep-specifieke antigenen, zijn rotavirussen verdeeld in zeven groepen: A, B, C, D, E, F, G. De meeste menselijke en dierlijke rotavirussen behoren tot groep A, waarbinnen subgroepen (I en II) en serotypen worden onderscheiden. Subgroep II omvat tot 70-80% van stammen geïsoleerd van patiënten. Er is bewijs van een mogelijke correlatie van bepaalde serotypen met de ernst van diarree.

Rotavirussen zijn bestand tegen omgevingsfactoren: in drinkwater, open waterlichamen en afvalwater blijven ze tot enkele maanden aanhouden, voor groenten - 25-30 dagen, voor katoen, wol - gedurende maximaal 15-45 dagen. Rotavirussen worden niet vernietigd door herhaaldelijk invriezen, onder invloed van desinfectieoplossingen, ether, chloroform, echografie, maar sterven wanneer ze worden gekookt, behandeld met oplossingen met een pH hoger dan 10 of minder dan 2. Optimale omstandigheden voor virussen: temperatuur 4 ° С en hoog (> 90%) of low (Auteur: Infectious diseases: national leadership, edited by ND Yuschuk, Yu. Ya. Vengerov. 2009

De diagnose van rotavirus-infectie

ik beweer
Plaatsvervangend hoofd
Chief epidemiological
Afdeling van het ministerie van Volksgezondheid van de USSR
G.G.ONISCHENKO

7 maart 1989 N 15-6 / 6

Rotavirus-infectie

(METHODISCHE AANBEVELINGEN)

Instituut voor poliomyelitis en virale encefalitis, Academie voor medische wetenschappen van de USSR.

Onderzoeksinstituut voor Epidemiologie van het Ministerie van Gezondheid van de USSR;

Onderzoeksinstituut voor Epidemiologie en Microbiologie. GN Gabrievskogo ministerie van Volksgezondheid van de RSFSR;

Scientific Production Association "Rostepidkompleks";

All-Union Scientific Research Institute of Desinfection and Sterilization of the USSR Ministry of Health.

Richtlijnen zijn bedoeld voor artsen en onderzoekers van gezondheidsautoriteiten en instellingen.

Menselijk rotavirus behoort tot een groep van vergelijkbare dierlijke virussen, die daarnaast het nebraska-kalfsdiarree-virus (NCDV), epizoötische diarreevirus van jonge muizen (EDJM), apenvirus (SA-II), het virus afkomstig van de darminhoud van schapen en vee (0), evenals de ziekteverwekkers van diarree varkens, veulens, puppy's en andere dieren. Al deze virussen hebben dezelfde grootte en vorm en zijn in antigene termen dicht bij elkaar.

Rotavirus-dieren fokken goed in weefselkweek en daarom werden ze geïsoleerd en bestudeerd voor het menselijke rotavirus. Rotavirussen van kalveren en apen werden, vanwege hun antigene nabijheid tot humaan rotavirus, gebruikt om de etiologische rol ervan bij acute gastro-enteritis vast te stellen en zijn tot op heden in hun serologische diagnostiek gebruikt en om immunoreagentia te verkrijgen.

Menselijk rotavirus werd gedetecteerd door elektronenmicroscopie in duodenale epitheelcellen en in extracten van feces van typische patiënten, waar het vaak in zeer significante concentraties zit (tot 10 deeltjes in 1,0 g feces). Rotavirus virion is een twee-capsid (dat wil zeggen gecoat met een tweeslagen proteïne omhulsel) bolvormig deeltje met een diameter van 70 - 75 nm, bevat ribonucleïnezuur - RNA (11 dubbelstrengs segmenten), heeft een zwevende dichtheid in cesiumchloride van 1,36 g / cu. cm met sedimentatiecoëfficiënt 500 - 530 S

Volgens de beschikbare kenmerken werd humaan rotavirus, samen met de dierlijke virussen die hierboven zijn opgesomd, geclassificeerd als een Rotavirus-geslacht van de familie Reoviridae. De naam "rotavirus" is afgeleid van de Latijnse rota - een wiel dat een deeltje van een virus lijkt op elektronenmicroscopische preparaten.

Volgens antigeenspecificiteit, gedetecteerd door ELISA, worden rotavirussen verdeeld in twee subgroepen (aangeduid met Romeinse cijfers - I en II) en door specificiteit, gedetecteerd in de neutralisatiereactie, met 4 (en mogelijk meer) serotypen (aangegeven met Arabische cijfers - 1 2, 3, 4). De subgroepspecificiteit van bepaalde rotavirussen wordt bepaald door het hoofdeiwit van het interne capside en hun serotypische specificiteit wordt bepaald door het glycoproteïne van het externe capside. Rotavirussen van een nieuw type (zogenaamde pararotavirussen) die geen groepspecifiek antigeen hebben zijn recent ontdekt.

Rotavirus-infectie is wijdverbreid. Informatie over de identificatie is gepubliceerd in Australië, Groot-Brittannië, DDR, Canada, India, Spanje, VS, Frankrijk, Japan en vele andere landen. In de Sovjetunie zijn ziekten van rotavirus gastro-enteritis geregistreerd bij kinderen en volwassenen in een aantal regio's van de RSFSR, Transkaukasië, Oekraïne, de Baltische staten, Centraal-Azië en andere gebieden. Bij kinderen en volwassenen kan een rotavirusinfectie zich manifesteren in de vorm van sporadische gevallen, plaatselijke groeps- ziekten en massale uitbraken waarbij verschillende bevolkingsgroepen over grote gebieden worden bestreken. Bij gehospitaliseerde patiënten met acute darminfecties is het aandeel volwassenen met rotavirus gastro-enteritis gemiddeld 10-15%, kinderen 15-27% of meer. De literatuurgegevens over de isolatie van rotavirus (antigeen) bij gezonde kinderen en volwassenen zijn zeer tegenstrijdig: van 0-0,5 tot 42% bij kinderen en van 0% tot 7% ​​of meer bij volwassenen. Rotavirus-infectie wordt het hele jaar door geregistreerd. In het koude seizoen wordt echter meer dan 70% van de patiënten gedetecteerd. In de winter-lente periode worden de meeste uitbraken van rotavirusinfecties onder de bevolking, evenals groepsproblemen bij pasgeborenen en premature baby's, kinderen van georganiseerde groepen, ouderen, ook geregistreerd. Er waren geen duidelijke verschillen in de verdeling van rotavirusinfecties (zowel kinderen als volwassenen) naar geslacht.

De bron van infectie bij acute intestinale infecties van rotavirus etiologie is geïnfecteerde volwassenen en kinderen - patiënten met een manifeste vorm van infectie of asymptomatische afscheidende rotavirussen met uitwerpselen. Tegelijkertijd worden kinderen uit het eerste levensjaar vaak besmet met moeders die besmet zijn met rotavirus, en oudere kinderen en volwassenen van kinderen van georganiseerde kindergroepen. Infectie van mensen van dieren is niet bewezen, hoewel de mogelijkheid hiervan niet is uitgesloten. Momenteel worden rotavirussen van verschillende serotypen aangetroffen in uitwerpselen van bijna 50 diersoorten en vogels met uitgesproken tekens van diarree en zonder deze.

Rotavirussen bij patiënten en personen zonder klinische manifestaties van de ziekte worden momenteel alleen in feces gevonden. Patiënten scheiden rotavirussen in de omgeving uit, vanaf de eerste dag van ziekte, terwijl bij alle patiënten de maximale hoeveelheid pathogeen in de feces (tot 10 - 10 virale deeltjes per 1 g) werd gedetecteerd tijdens de eerste vijf dagen van de ziekte, wat het grootste epidemiologische risico van patiënten voor anderen bepaalt deze periode van ziekte. Gedurende de volgende 6 tot 10 dagen daalt de afgifte van rotavirussen met de uitwerpselen van patiënten scherp als de ontlasting normaliseert. De gemiddelde duur van uitscheiding van rotavirussen door patiënten is 7-8 dagen, maar bij sommige patiënten kan deze periode tot 20-30 dagen duren. Personen zonder klinische manifestaties van de ziekte kunnen op lange termijn rotavirussen met faeces vrijgeven - tot enkele maanden of meer (observatieperiode).

Het hoofdmechanisme van transmissie van rotavirussen is fecaal-oraal, wat wordt gerealiseerd door water, voedsel en binnenlandse transmissieroutes. In het geval van sporadische en lokale groep ziekten, vindt infectie met rotavirussen voornamelijk plaats door huishoudelijke middelen. Dit draagt ​​bij tot een zeer lage pathogene dosis rotavirussen (binnen 10 virale deeltjes). Er is vastgesteld dat op verschillende milieusites rotavirussen hun levensvatbaarheid behouden vanaf 10-15 dagen (afhankelijk van temperatuur en vochtigheid) tot één maand; in ontlasting van enkele weken tot zeven maanden.

Momenteel worden water- en voedseluitbraken van rotavirusinfecties geregistreerd in ons land en in het buitenland. Rotavirussen worden aangetroffen in het water van rivieren, meren, zeeën, grondwater, kraanwater, bepaalde voedingsproducten (melk, enz.).

De mogelijkheid van implementatie in sommige gevallen van druppel, stof en andere wegen van rotavirus is vermoedelijk.

Rotavirussen zijn ook bekend als een van de belangrijkste etiologische agentia in nosocominal (nosocomiale) uitbraken van acute gastro-enteritis. In ziekenhuizen met verschillende profielen kunnen tot 50-60% van de zieke kinderen besmet raken. Er zijn gevallen van uitbraken in kraamklinieken. Is vaak van invloed op kinderen die kunstmatig eten, lijden aan acute en chronische ziekten, met verschillende soorten immunodeficiëntie.

Gevoeligheid immuniteit. Mensen van alle leeftijdsgroepen zijn vatbaar voor rotavirus. De grootste gevoeligheid wordt waargenomen bij kinderen van 6 maanden. tot 2 jaar. Antistoffen tegen rotavirussen worden gedetecteerd bij 50-60% van de kinderen in het eerste levensjaar, op de leeftijd van meer dan 3 jaar oud - meer dan bij 90% en bij bijna alle volwassenen. Volgens de literatuur duidt de aanwezigheid van antilichamen in het serum echter in principe alleen op een ontmoeting van het menselijk lichaam met rotavirus, en niet op de aanwezigheid van immuniteit, omdat zelfs met een significant niveau aan humorale antilichamen herhaalde ziekten mogelijk zijn. Immuniteit met rotavirus-infectie is niet volledig begrepen. Resistentie tegen infectie wordt waarschijnlijk voornamelijk veroorzaakt door de lokale immuniteit van de epitheelcellen van het dunne darmweefsel, wat geassocieerd is met de aanwezigheid van secretoire antilichamen van de IgA-klasse. Deze antilichamen zijn ook gevonden in de melk van zogende moeders, en blijkbaar dienen factor passieve immunisatie van de pasgeboren kinderen die in de afwezigheid van klinische ziekte in de faeces aanzienlijke hoeveelheden rotavirus voor het milieu kunnen uitzenden en infecteren vroeg geboren kinderen en kinderen met premorbide negatieve achtergrond. Rotavirussen van verschillende serotypen creëren geen kruisimmuniteit, en daarom kan hetzelfde kind of dezelfde volwassene herhaaldelijk ziek worden door andere serotypen van het virus. Het onstabiele karakter van immuniteit bij patiënten met rotavirus gastro-enteritis wordt ook opgemerkt, herhaalde ziekten worden vaak 1-1,5 jaar na de infectie geregistreerd.

Kenmerken van het epidemische proces met rotavirus-infectie:

- de alomtegenwoordigheid van territoriale distributie;

- strenge seizoensinvloeden in winter of winter;

- lage besmettelijke dosis pathogeen en hoge foci in georganiseerde groepen;

- schade aan personen van alle leeftijdsgroepen;

- een groot deel van de gevallen bij kinderen jonger dan 2 jaar met de maximale detectie van ziekten bij kinderen van de tweede helft van het leven;

- hoge activiteit van water en binnenlandse transportroutes;

- locatie van thuis foci, meestal beperkt tot familie;

- de mogelijkheid van asymptomatische isolatie van rotavirussen bij kinderen en volwassenen;

- de mogelijkheid van nosocomiale infectie met de deelname van medisch personeel en ouders van zieke kinderen.

Het klinische beeld van rotavirusinfectie heeft veel gemeen met de klinische manifestaties van acute darmziekten van een andere etiologie, waardoor het moeilijk is om deze ziekte te diagnosticeren. Er zijn echter een aantal kenmerkende verschillen die het mogelijk maken om deze ziekte tijdig te vermoeden en correct anti-epidemische en therapeutische maatregelen uit te voeren.

De incubatietijd is kort en duurt van 15 uur tot 3-5 dagen, maar meestal - 1 - 3 dagen.

De meeste patiënten hebben een acuut begin van de ziekte, wanneer het gehele symptoomcomplex zich tijdens de eerste dagen van de ziekte ontwikkelt. Bij jonge kinderen is een subacuut begin mogelijk, gekenmerkt door het uiterlijk in de eerste dagen van de ziekte van 1 of 2 symptomen en de toevoeging van de rest van 2 tot 3 dagen van ziekte. De meest pathognomonische voor rotavirus-infectie is schade aan het maagdarmkanaal, die bij 60-70% van de patiënten wordt gecombineerd met de ontwikkeling van symptomen van schade aan de luchtwegen. Soms kunnen catarrale symptomen 3-4 dagen van intestinale disfunctie voorafgaan. Het ademhalingssyndroom wordt gekenmerkt door matige hyperemie en granulariteit van de keelholte, zachte gehemelte en palatinebogen, verstopte neus, hoest, die, in tegenstelling tot ARVI, minder uitgesproken zijn, niet de neiging hebben te stijgen en van korte duur zijn (4 - 5 dagen). Diarree komt voor bij 95-97% van de patiënten. Voor rotavirus infectie wordt gekenmerkt door de ontwikkeling van gastro-enteritis, minder enteritis. De stoel is meestal vloeibaar, waterig, schuimig, slecht gekleurd, zonder onzuiverheden of met een kleine hoeveelheid slijm. Bij jonge kinderen heerst waterige diarree, wat de frequentere ontwikkeling van exsicose in deze leeftijdsgroep verklaart. De frequentie van stoelgang gemiddeld niet meer dan 4 tot 5 keer per dag, maar kan 15 tot 20 keer bij jongere kinderen. De duur van diarree bij volwassenen en oudere kinderen is 3 - 7 dagen, bij zuigelingen duurt dit vaak maximaal 10 - 14 dagen. Braken is een hoofdsymptoom en wordt opgemerkt bij 80% van de patiënten met een rotavirusinfectie. Meestal gebeurt het gelijktijdig met diarree of gaat het eraan vooraf. Braken wordt vaak herhaald, maar op korte termijn (1 - 2 dagen). Herhaald en onbeheersbaar braken voor deze infectie is niet typisch en duidt vaak op een gemengde infectie. De temperatuur is in de regel niet hoger dan 38,5 - 39 ° C en wordt genormaliseerd met 3-4 dagen ziekte. De meest typische tekenen van algemene intoxicatie zijn zwakte, lethargie, zwakte, hoofdpijn, duizeligheid. De ernst van de ziekte wordt bepaald door de ontwikkeling van isotone exsicose, I - II graad, minder vaak III graad, wat vaker voorkomt bij zuigelingen. Tegelijkertijd zijn de elektrolytverliezen (Na en K) klein, waarmee rekening moet worden gehouden bij het uitvoeren van rehydratatietherapie.

4. Diagnose en differentiaaldiagnose

Een objectief onderzoek bij patiënten wees op lethargie, conjunctivale hyperemie en vasculaire injectie van de sclera. Tong matig gecoat, droog. De buik is zacht, matig pijnlijk bij palpatie in het gebied van de dunne darm. De lever en milt zijn niet vergroot. Blinde en sigmoïde dikke darm zacht, pijnloos. Bloeddruk is verminderd. De polsslag is niet verstopt, maar eerder is er een tendens tot relatieve bradycardie. Er zijn geen meningeale verschijnselen. In perifeer bloed, helemaal aan het begin van de ziekte, kan matige leukocytose optreden, van 2 tot 3 dagen van de ziekte is er een neiging tot leukopenie met een afname van het aantal leukocytensteken en een toename van het aantal lymfocyten en monocyten, de ESR wordt niet versneld.

In de laboratoriumanalyse van urine is er een lichte albuminurie, een snel voorbijgaande microhematurie, een lichte toename van het aantal leukocyten en het verschijnen van hyaliene cilinders is mogelijk. Veranderingen in urine zijn in overeenstemming met de ernst van de ziekte en uitdroging.

Microscopisch onderzoek van feces het aantal leukocyten niet hoger is dan 10 - 15 in het gezichtsveld, is er een mengsel van slijm.

Rectoromanoscopisch is het mogelijk om gematigde hyperemie van het slijmvlies van het rectum en sigmoïde colon zonder verhoudingsgewijze veranderingen te onthullen.

Rotavirus gastro-enteritis wordt gedeeld door de ernst, die wordt bepaald door de intensiteit van diarree en de uitdroging die daardoor wordt veroorzaakt, evenals de ernst van algemene intoxicatie. Er zijn drie graden van ernst van rotavirus gastro-enteritis: mild, matig zwaar en minder vaak ernstig.

Differentiële diagnose wordt uitgevoerd met salmonellose, cholera, dysenterie, voedselgedragen toxico-infecties veroorzaakt door conditioneel pathogene micro-organismen, persiniosis en andere virale gastro-enteritis.

Gastro-intestinale vorm van salmonellose wordt gekenmerkt door de gelijktijdige ziekte van personen die producten van slechte kwaliteit aten. Typisch acuut begin: hyperthermie, ernstige koude rillingen, braken, ernstige buikpijn, overvloedige stinkende ontlasting die zijn fecale karakter behoudt, neutrofiele leukocytose met een verschuiving van de leukocytformule naar links. Bij salmonellose, zijn er geen veranderingen in het slijmvlies van de keelholte, de lever is meestal vergroot. Isolatie van het pathogeen bij het bacteriologisch onderzoek van faeces, braaksel of maagspoeling lost de diagnose op.

Volgens veel klinische verschijnselen van massa en snelheid van ziekte kan rotavirus gastro-enteritis lijken op cholera. Maar rotavirusinfectie onderscheidt zich door een mildere loop, en in het bijzonder door het feit dat het de conditie van algid niet ontwikkelt, evenals de aanwezigheid van typische veranderingen in het slijmvlies van de orofarynx.

De belangrijkste zijn de resultaten van bacteriologisch onderzoek in het geval van de detectie van Vibrio cholerae. Een vergelijkbare situatie doet zich voor bij een NAG-infectie.

Bacteriële dysenterie wordt gekenmerkt door acute buikpijn, frequent, soms vals, aandringen, ontlasting vermengd met slijm en bloed, gemarkeerde sigmoiditis, constante koortsreactie, pathologische veranderingen in het distale deel van de dikke darm volgens rectoscopie. Al deze signalen, evenals de resultaten van bacteriologisch onderzoek, maken het relatief gemakkelijk om differentiële diagnostiek uit te voeren voor de vorm van dysenterie in colitis. Met gastro-enterische vorm van dysenterie neemt de waarde van bacteriologische onderzoeksresultaten dramatisch toe.

Differentiële diagnostiek van rotavirus gastro-enteritis en voedselgedragen toxico-infecties veroorzaakt door opportunistische pathogenen zijn bijzonder moeilijk, gezien de onvoldoende kennis van het klinische beeld van deze ziekten. Volgens de diagnostische significantie van laboratoriumstudies moet de voorkeur worden gegeven aan positieve resultaten van virologische en immunologische onderzoeken die de rotaviruskarakteristiek van de ziekte bevestigen, in plaats van na detectie van voorwaardelijk pathogene bacteriën in de ontlasting van de patiënt.

Voor de gastro-intestinale vorm van periniosis is een meer geleidelijk begin kenmerkend, de aanwezigheid, samen met gastro-enteritis, van pijn in spieren en gewrichten; de lever is meestal vergroot; de ontlasting is viskeus vanwege een aanzienlijke vermenging van slijm en soms is bloed mogelijk. Leukocytose wordt genoteerd in het bloed; ESR verhoogd.

Gastro-enteritis syndroom kan prominent zijn in sommige virale ziekten. Deze omvatten adenovirale infectie, die, naast intestinale laesies, wordt gekenmerkt door conjunctivitis, rhinitis, faryngitis, tonsillitis, bronchitis, pneumonie, een toename van cervicale lymfeknopen, lever, milt, langdurige koorts.

Van enteritis en gastro-enteritis, veroorzaakt door enterovirussen van Koksaki en ECHO, wordt rotavirus gastro-enteritis gekenmerkt door een monosyndroom klinisch beeld, waarbij darmbeschadiging de leidende plaats inneemt. Daarentegen wordt tijdens epidemische uitbraken van de enterovirusaard de aanwezigheid van verschillende klinische vormen van de ziekte opgemerkt, de "veelvormigheid" van het klinische beeld, waarbij symptomen van beschadiging van de membranen van de hersenen, huid en de bovenste luchtwegen een belangrijke rol kunnen spelen.

Differentiële diagnose van rotavirus-infectie met colibacillose bij kinderen is het moeilijkst en kan worden gebaseerd op de volgende criteria:

- groter acuut begin van rotavirusinfectie vergeleken met colibacillose, in het bijzonder veroorzaakt door enteropathogene colibacillose;

- sneller herstel van rotavirusinfectie, zelfs bij jonge kinderen;

- hogere frequentie van respiratoir syndroom in geval van rotavirusinfectie, maar de geringere ernst en duur ervan.

De grootste moeilijkheid is de diagnose van gemengde rotavirus-bacteriële infecties, waarvan het aandeel in de winter seizoenen van het jaar vrij groot is (7 - 10% van alle OKI).

Een kenmerk van de kliniek van gemengde infecties is de aanwezigheid van symptoomcomplexen die kenmerkend zijn voor beide gecombineerde infecties: een toename van de symptomen van intoxicatie, het optreden van tekenen van ontstekingsveranderingen in het slijmvlies van de dunne en dikke darm en een langzamer herstel.

Ziekenhuisopname van kinderen en volwassenen met verdenking op OCI veroorzaakt door rotavirussen wordt uitgevoerd op geleide van de klinische (ziekteslechtheid) en epidemiologische indicaties (aanwezigheid van zwakke kinderen in de omgeving van de patiënt, kinderen van het eerste levensjaar, bijwonende kinderopvanginstellingen, werknemers in de voedingsindustrie en personen die met hen gelijkgesteld zijn het onvermogen om te voldoen aan het anti-epidemische regime thuis, enz.). Kinderen jonger dan één jaar met ernstige OCI-symptomen worden eerst opgenomen in het ziekenhuis. Afzonderlijke hospitalisatie van patiënten met verdenking op rotavirus gastro-enteritis en acute darminfecties van een andere etiologie (afzonderlijke afdelingen, boxen) is verplicht. Het principe van "eenmalige vulling" van kamers (dozen) moet in acht worden genomen.

Behandeling van patiënten met rotavirus gastro-enteritis, rekening houdend met de bestaande ideeën over de pathogenese van deze ziekte, omvat een spaarzaam regime en compensatie voor schendingen van de functionele toestand van de darm, herstel van hydro-elektrolytenbalans en ontgifting van het lichaam.

Op het moment van de acute periode van de ziekte wordt een 4-B dieet voorgeschreven, waarbij er een scherpe beperking is van koolhydraten (tot 200 g) en een toename van de hoeveelheid eiwit (tot 150 g) met een lichte daling van het caloriegehalte (2400 cal.). De hoeveelheid suiker is beperkt tot 40 g per dag, groenten en fruit. Melk is uitgesloten. Zout is niet beperkt.

Het doel van dergelijke binnenlandse spijsvertering multienzympreparaten als oraz, solizim, somilase, die bij de behandeling van patiënten met rotavirus gastro-enteritis niet inferieur is aan import (panzinorm, digestal, festal, trienzyme, etc.), wordt getoond.

De mate van uitdroging van het organisme wordt noodzakelijk geëvalueerd en er wordt een therapie uitgevoerd gericht op het bijvullen van de overmatige verliezen aan water en zouten. Bij uitdroging is I - II graad volgens V.I. Glucose-elektrolytoplossingen worden oraal toegediend aan Pokrovsky (rehydron glucosolan), rekening houdend met het verlies van vloeistoffen en elektrolyten, en na dehydratie van de III-graad is het noodzakelijk om de behandeling te beginnen met intraveneuze toediening van waterzoutoplossingen (trisol, quartosol, chlosol, acesol), enz.

De tactiek van de introductie van oplossingen wordt uitgevoerd in overeenstemming met de principes van rehydratietherapie.

Om de normale bloedsomloop en ontgifting te stabiliseren, kunt u colloïdale oplossingen invoeren (gemodez, polyglukin, reopolyglukine).

Het moet worden benadrukt dat het voorschrijven van antibacteriële geneesmiddelen, als er geen bijkomende bacteriële infectie is, niet gerechtvaardigd is.

Het is raadzaam om adsorbens en adstringerende medicijnen te gebruiken.

Behandeling van virusinfectie is momenteel niet ontwikkeld.

Het extract van convalescents wordt uitgevoerd na een stabiele (binnen 2 - 3 dagen) normalisatie van de ontlasting en het verdwijnen van alle andere klinische symptomen van de onderliggende ziekte in de afwezigheid van complicaties.

Kinderen die kleuterschoolinstellingen, werknemers in de voedselvoorziening en personen die daaraan gelijkgesteld zijn, krijgen een eenmalig virologisch onderzoek na het verdwijnen van klinische symptomen.

De resterende contingenten van patiënten zijn niet onderworpen aan een verplicht laboratoriumonderzoek.

6. Laboratoriumdiagnose

Laboratoriumdiagnostiek van rotavirus gastro-enteritis is momenteel niet moeilijk. De snelle ontwikkeling van het klinisch syndroom en de kortdurende ziekenhuisopname dicteren de noodzaak van het gebruik van snelle methoden voor het bepalen van de etiologie van de ziekte. De meeste laboratoriumdiagnosemethoden die in deze handleiding worden aanbevolen, bieden u de mogelijkheid om rotavirussen gedurende de eerste dag te detecteren. De keuze van de methode in elk geval wordt bepaald door de technische uitrusting van het laboratorium, evenals de beschikbaarheid van geschikte reagentia.

Traditionele methoden voor het detecteren van serologische veranderingen in de sera van patiënten (neutralisatiereactie, hemagglutinatieremming en complementfixatie) zijn belangrijk bij de retrospectieve analyse van de ziekte. Daarom wordt voor de vroege serologische diagnose van rotavirusinfectie de bepaling van IgM-klasse antilichamen aanbevolen.

Het doel van de virologische studie van een zieke is meestal ontlasting. De aanwezigheid en distributie van rotavirussen in de omgeving worden gedetecteerd door monsters van bodem, voedsel en water te onderzoeken (afvalwater, water uit natuurlijke en kunstmatige reservoirs, drinkwater).

6.1. Detectie van rotavirussen in klinisch materiaal

en in milieustalen

6.1.1. Monstervoorbereiding voor testen; monsterneming

Bij het nemen van monsters voor virologisch onderzoek wordt aan een aantal algemene vereisten voldaan, waarbij maatregelen worden genomen om het materiaal tegen contaminatie te beschermen. Monsters worden alleen in steriele schalen met een dichte rubberen stop, versterkt hechtpleister, genomen. Transportmonsters in containers met ijs of koelmiddel.

6.1.2. Opschorting voorbereiding, verduidelijking,

monsterreiniging, verwijdering van bacteriële flora

Bereiding van monsters van feces voor een onderzoek op rotavirus omvat de bereiding van een suspensie van 10%, homogenisatie, centrifugatie bij 3000 rpm. binnen 30 minuten om de bacteriële flora te verwijderen. Bij het onderzoeken van objecten van de omgeving en voedselproducten wordt pre-concentratie van het bestudeerde materiaal uitgevoerd.

6.1.3. Concentratie van virusdeeltjes in watermonsters

Concentratie van rotavirussen is een belangrijke voorwaarde voor het verhogen van de efficiëntie van hun detectie in watermassa's in de omgeving.

De methode om rotavirussen te concentreren met behulp van adsorptiechromatografie op poreus silica - macroporeus glas (MPS) - is eenvoudig en gemakkelijk, met behulp van watervolumes van 0,1 tot 10 liter. Wanneer het monster door de MPS-laag wordt gevoerd, wordt het virus op het glasoppervlak gesorbeerd. Voor de elutie van het virus met behulp van oplossingen die het vermogen hebben om desorptie van het virus te veroorzaken. Het virus wordt met een klein volume oplossing uit het glas verwijderd, wat leidt tot een concentratie van tientallen tot honderden keren vergeleken met het oorspronkelijke monster.

Om de adsorptie-eigenschappen te verbeteren, worden huishoudelijke preparaten van glas van het merk MPS-1000 VGH als volgt behandeld: een mengsel (1: 1) van 3% H0 en 6 M HCl wordt bereid. Het glas wordt gevuld met het bereide mengsel in een hoeveelheid van 1 volume glas voor 2 volumes van het mengsel. Kook in een zuurkast (zonder stop) gedurende 1 uur, rekening houdend met veiligheidsmaatregelen. Was tot neutrale pH met gedestilleerd water. Droog bij 100 ° C.

Glazen kolom, voorbehandeld met siliconenvloeistof, gevuld met glas (2 - 3 cc), gedrenkt in gedestilleerd water. Voeg aan het testmonster (3 l) 1 M oplossing van MgCl toe tot een eindconcentratie van 0,05 M. Water wordt door de kolom geleid met een snelheid van 150-500 ml / uur, waarbij de stroomsnelheid wordt aangepast met behulp van klemmen. Laat de kolom 10 ml van een elutieoplossing passeren: vleesextract 3%, pH 9,0; of tryptose fosfaatbouillon 1%, pH 9,0; of Tris HCl 0,1 M, dat 2 M NaCl bevat, pH 11,0 (oplossingen worden opgesomd in volgorde van afname van hun elutie-eigenschappen). Sorbeer de fracties met een volume van 1 ml, de pH in de fracties wordt op een neutrale waarde gebracht.

6.2. Detectie van virale deeltjes met behulp van elektronenmicroscopie (EM) en immuno-elektronenmicroscopie (IEM)

Omdat de inhoud van rotavirusdeeltjes in de ontlasting van typische patiënten meestal hoog is in de eerste 2-3 dagen van de ziekte, wordt de EM-methode veel gebruikt om rotavirus te detecteren, dat kan worden gebruikt om rotavirusdeeltjes te detecteren zonder extra concentratie van de fecale suspensie.

Voor de bereiding van geneesmiddelen wordt een druppel van de onderzochte 10% suspensie aangebracht op een plaat van tandwas of waspapier. Leg op een druppel van het filmsubstraat een onderwerp neer met een elektronenmicroscopisch raster. Na 1 - 3 minuten het rooster wordt gewassen op een druppel gedestilleerd water en een contrastoplossing (2% oplossing van fosforotungtinezuur, ingesteld op pH 6,5 - 6,6 met 1 NKOH), waarvan de overmaat na 30 - 40 seconden is. verwijder het filterpapier en het gaas is gedroogd. Het bekijken van de voorbereidingen wordt uitgevoerd in een elektronenmicroscoop met een instrumentele vergroting van 30 - 50000x.

Rotavirussen worden vrij gemakkelijk gedetecteerd door EM-onderzoek van fecale suspensies in kenmerkende groottes en morfologie van virale deeltjes. Rotavirussen moeten worden onderscheiden van verschillende virusdeeltjes en virusachtige formaties, bacteriofaagdeeltjes en bacteriële flagellen gevonden in fecaal materiaal.

Het gebruik van IEM-technologie maakt het in sommige gevallen niet alleen mogelijk om het percentage detectie van rotavirussen te verhogen, maar ook om hun etiologische rol te bewijzen. Voor het IEM-onderzoek werd 0,1 ml van 1: 5 verdund immuunserum van dieren gemengd met 0,4 ml 10% fecaal extract. Het mengsel wordt gedurende 1 uur bij kamertemperatuur en vervolgens gedurende 12 uur bij 4 ° C geïncubeerd, waarna het gedurende 90 minuten wordt gecentrifugeerd. bij 15.000 tpm Het supernatant wordt gedraineerd en het resulterende precipitaat wordt geresuspendeerd in enkele druppels gedestilleerd water, in contrast met een 2% oplossing van fosforwolfraamzuur (pH 6,5) en op objectrasters geplaatst; overtollig vocht wordt verwijderd met filterpapier. De studie van geneesmiddelen wordt uitgevoerd in een elektronenmicroscoop met een instrumentele vergroting van 50000x, waarbij wordt gekeken naar ten minste vijf cellen van het onderwerpraster. In het geval van een positief resultaat, worden rotavirusdeeltjes gedetecteerd in preparaten in de vorm van specifieke clusters (immuuncomplexen).

6.3. Detectie van rotavirus-antigeen in het testmateriaal

6.3.1. Immunoreagentia krijgen

Hyperimmuunsera en specifieke rotavirusimmunoglobulinen worden verkregen door immunisatie van konijnen, cavia's, kippen.

Antigeen voor immunisatie werd als volgt bereid: 5 ml kweeksuspensie van rotavirus SA-II werd behandeld met trypsine, toegevoegd aan matrasflessen van 1,5 liter met een monolaag van heteroploïde cellen van de groene apennier 4647, 60 minuten bij 37 ° C geïncubeerd; voeg serumvrij onderhoudsmedium toe en incubeer gedurende 24 tot 48 uur bij 37 ° C. Alle biomassa wordt onderworpen aan drievoudig bevriezen of sonicatie, voeg PEG M 6000 toe tot een concentratie van 8 - 10%, laat 20 uur staan ​​bij 4 ° C en vervolgens gecentrifugeerd bij 10.000 rpm. 2 uur De pellet wordt opnieuw gesuspendeerd in PBS (1/30 - 1/50 van het volume van de biomassa). Na reiniging met freon 113 wordt de waterige fase gebruikt om dieren te immuniseren en als een antigeen in immunologische onderzoeken. Concentraat in een volume van 1 ml bevat ten minste 10 virale deeltjes.

Immunisatie van konijnen: konijnen worden intraveneus geïnjecteerd met 2 ml rotavirusbereiding op dagen 1, 7, 35, 42 en bloed wordt genomen op dag 49 na het begin van immunisatie. Op dagen 1 en 35 wordt het antigeen geïnjecteerd met een aanvullend Freund's compleet adjuvans op verschillende punten van de rug.

De immunoglobulinefractie wordt geprecipiteerd uit hyperimmuun konijnenserum met 10% waterige oplossing van polyethyleenglycol (PEG) met een molecuulgewicht van 6000. Het precipitaat wordt verzameld door centrifugatie, opgelost en gedialyseerd tegen 0,01 M K-fosfaatbuffer (pH - 7,4) met 0:01 M Nace ( FSB). De concentratie van immunoglobulines bepaald spectrofotometrisch.

Immunisatie van cavia's: dieren worden intramusculair geïnjecteerd met 0,5 ml van een geconcentreerd rotaviruspreparaat met een gelijk volume Freund's volledig adjuvans op 1,14 en 28 dagen, bloedmonsters twee weken na de laatste immunisatie.

Immunisatie van kippen: 20 weken oude kippen van leghennen van hybriden van het witte Leghorn Zarya-17-ras worden intraveneus geïmmuniseerd op 1, 14, 28 dagen. Tijdens de eerste immunisatie wordt het antigeen bovendien intramusculair toegediend in een mengsel met een gelijk volume Freund's volledig adjuvans. De maximale hoeveelheid antilichaam in de dooier wordt na de derde immunisatie waargenomen. Kippen kunnen permanent worden gebruikt na herimmunisatie.

Isolatie van kippen Immunoglobulinen: de dooier wordt gescheiden van het eiwit in de schaal of Büchner-trechter en gewassen met kraanwater. De dooier (10 ml) wordt overgebracht naar een centrifugebuis, dubbel volume (20 ml) van de FSB toegevoegd en grondig gemengd. PEG 6000 wordt aangebracht op een concentratie van 3,5% (w / v) en gedurende 10 minuten gemengd. bij 14000 g. Het supernatant wordt door een filtreerpapier in een maatcilinder gefiltreerd. Voeg extra PEG 6000 toe tot een eindconcentratie van 12% en meng. De geprecipiteerde immunoglobulinen worden verzameld door centrifugatie (10 min. 14.000). Het precipitaat wordt opgelost in 5 ml FSB (1/2 volume eigeel). De concentratie van eiwit in het preparaat is gewoonlijk 6 - 12 mg / ml.

6.3.2. Methode van enzymimmunoassay (ELISA)

De methode van enzymimmunoassay (ELISA), op basis van het gebruik van antilichamen die zijn gemerkt met een enzymmolecuul (peroxidase), is een van de meest voorkomende en effectieve en specifieke methoden voor het detecteren van viraal antigeen. Gebruik meestal de directe en indirecte "sandwich" - opties. Enzymmarker gedetecteerd in kleurreactie met het substraat. De directe ELISA-variant is sneller dan de indirecte, maar is minder gevoelig en specifiek. Bij de formulering van een indirecte variant wordt een anti-specifiek commercieel conjugaat van immunoglobulinen met een enzym gebruikt; Om niet-specifieke interacties tussen het conjugaat en de op het paneel gesorbeerde antilichamen te voorkomen, is het noodzakelijk om antivirale sera van twee verschillende diersoorten te hebben.

Indirecte ELISA-variant: 0,1 ml anti-thromtaun immunoglobulinen uit de dooier van de eieren van geïmmuniseerde kippen in de helft (48) van de putjes worden in de putjes ingebracht. In de andere helft worden immunoglobulinen uit eieren gelegd voorafgaand aan immunisatie geïntroduceerd als negatieve controle. De sorptie van immunoglobulinen wordt gedurende de nacht bij 4 ° C uit een oplossing met een concentratie van 5 μg / ml in PBS uitgevoerd. De inhoud van de putjes wordt gedraineerd, de putjes worden gewassen met PBS-T en 0,1 ml van het testmonster wordt aangebracht in PBS-T met 1% BSA en 0,01 M EDTA aan de putjes met antirotavirus en normale immunoglobulinen en gedurende 1 uur bij 37 ° C geïncubeerd.

Na het wassen wordt 0,1 ml konijnen-antirotavirus-serum verdund tot 1: 1000 - 1: 25000 aan de putjes in PBS-T-buffer toegevoegd. De optimale verdunning van serum wordt bepaald in vooraf ingestelde experimenten. Panelen worden gesloten en gedurende 2 uur bij 37 ° C geïncubeerd. De putjes worden gewassen en 0,1 ml van een in de handel verkrijgbaar preparaat van peroxidase-gelabelde antilichamen tegen konijnen-IgG in een concentratie van 1 tot 2,5 μg / ml in peroxidase-gehalte in PBSB-T-BSA wordt toegevoegd en gedurende 1 uur bij 37 ° C geïncubeerd. De putjes worden gewassen, voeg 0,1 ml vers bereid substraatmengsel toe (O-fenyleen-diamine 0,5 mg / ml in 0,05 M Na-citraatbuffer pH 5,0; HO - 0,03%. (Let op! Werk vereist wees voorzichtig!)) en incubeer bij kamertemperatuur in het donker gedurende 30-40 minuten. De enzymatische reactie wordt gestopt door toevoeging van 0,05 ml 3 M H SO. De resultaten van de reactie houden visueel of spectrofotometrisch rekening. Monsters worden als positief beschouwd, waarvan de optische dichtheid niet minder is dan 2 maal de optische dichtheid van de negatieve controle.

6.3.3. Coagglutinatiemethode

Deze methode is gebaseerd op het vermogen van proteïne A Staphylococcus aureus van Cowan-stam om verbinding te maken met het Fc-fragment van IgG en, tijdens de vorming van een specifiek antigeen-antilichaamcomplex, het agglutinatieverschijnsel te veroorzaken.

Voor de formulering van de coagglutinatiereactie wordt een in de handel verkrijgbaar droog stafylokokkenreagens dat proteïne A bevat (Pasteur Research Institute of Electrochemical Medicine, Leningrad) gebruikt, dat vóór gebruik wordt gerehydrateerd in een 0,1% oplossing van methyleenblauw.

Eerder werd elke reeks hyperimmuunserum getest op de aanwezigheid van antistafylococcen-antilichamen. Om dit te doen, meng op een glasplaatje gelijke hoeveelheden serum in een verdunning van 1: 500 en 10% suspensie van stafylokokken. Houd rekening met de resultaten binnen 5 minuten na het onderwijsagglutinaat. Voor het werk van geselecteerd serum, dat geen antistafilokokken-antilichamen bevat in een verdunning van 1: 500. Voor de bereiding van het diagnosticum wordt 0,01 ml anti-ratavirusserum 1:10 verdund met FSB gemengd met 0,5 ml 10% suspensie van stafylococcen, 1 uur op kamertemperatuur gehouden, vervolgens 9,5 ml FSB (diagnosticum) toegevoegd. Op dezelfde manier wordt staphylococcus gesensibiliseerd met pre-immuunserum (controlereagens). Diagnosticum en controlereagens worden gebruikt bij de reactie van PKA en TRKA.

Voor het stagen van de RCA in de u-vormige putjes van het paneel maakt u 0,05 ml PBS pH-7,4; in twee putjes maakt Takacchi microtiter of dispenser 0,05 ml van 10% suspensie van faeces en bereid seriële tweevoudige verdunningen van 1: 2 - 1: 256 voor. Voeg aan de wells van de eerste rij 0,05 ml diagnosticum toe en aan de wells van de tweede rij 0,05 ml controlereagens. De panelen zijn bedekt met een deksel en geïncubeerd in een thermostaat bij 37 ° C - 3 uur. In elk experiment een monster van een positieve en negatieve suspensie van faeces voor rotavirus, evenals lysaten van cellen die zijn geïnfecteerd met het rotavirus SA-II, eerder getest met elektronenmicroscopie.

Behandeling van de reactie: de resultaten worden als positief beschouwd wanneer een agglutinatie "paraplu" wordt gedetecteerd samen met het diagnosticum, met een negatief resultaat of een viervoudige afname van de titer parallel met het controlereagens. De resultaten worden als negatief beschouwd wanneer schijven in beide parallelle rijen worden gevormd. Om niet-specifieke coagglutinatie in de gepaarde rijen te elimineren, wordt de feces-suspensie geadsorbeerd met een gelijk volume van normaal konijnenserum bij 37 ° C gedurende 2 uur, gevolgd door verwarming gedurende 45 minuten bij 80 ° C. Ervaar dan opnieuw de reactie van coagglutinatie.

6.3.4. Methode van de vaste fase reactie van coagglutinatie (TRKA)

Deze methode voor het detecteren van rotavirus-antigenen is gebaseerd op de principes van de vaste-fase immunoassay-methode (zie 4.3.2). In tegenstelling tot de laatste, gebruikt TRCA het enzym echter niet als een label, maar als diagnosticum en controlereagens (zie 4.3.3).

Gebruik voor het stagen van TRKA immunologische panelen met U-vormige wells. Voor sensibilisatie wordt 0,1 ml hyperimmune serum verdund met 0,01 M carbonaat-bicarbonaatbuffer (pH 9,6) 1: 1000 aan de putjes toegevoegd. Serumpanelen worden 2 tot 3 uur bij 37 ° C bewaard. Niet gebonden aan de vaste fase antilichamen worden verwijderd door driemaal gedurende 3 minuten te wassen. FSBT. Maak daarna 0,05 ml van de bestudeerde, evenals duidelijk positieve en negatieve monsters (2 putjes voor elk monster) in de putjes en laat gedurende 2 uur bij 37 ° C staan ​​om antigeen-antilichaamcomplexen te vormen. Niet-gebonden antigeen en verwante onzuiverheden worden verwijderd door driemaal witwassen van PBS. Voeg vervolgens in één put 0,05 ml 0,5% stafylokokkendiagnosticum toe, in de tweede (controle) 0,05 ml 0,5% suspensie van Staphylococcus gesensibiliseerd met pre-immuun serum (zie 4.4.3). Incubatie wordt uitgevoerd gedurende 1 tot 2 uur bij 37 ° C, gevolgd door plaatsing gedurende 1 tot 3 uur bij 4 ° C, of ​​gedurende 18 tot 24 uur bij 4 ° C. Het resultaat van de agglutinatiereactie wordt visueel in rekening gebracht: met een positieve reactie vormen de geagglutineerde bacteriën een paraplu; met een negatieve reactie - de bacteriën bezinken volledig in de vorm van een schijf.

6.3.5. Methode van indirecte hemagglutinatie

Bij deze methode is de detectie van rotavirus-antigeen gebaseerd op het gebruik van een erytrocyt-antilichaamdiagnosticum, dat een schapenerytrocyten is die zijn gesensibiliseerd door de immunoglobuline ascitesvloeistof van witte ratten geïmmuniseerd met rotavirus SA-II.

Tweevoudige verdunningen van 10% fecale suspensie in de paneelputjes worden getest met een erythrocyte-diagnosticum. Agglutinatie van erytrocyten diagnosticum geeft de aanwezigheid van rotavirus-antigeen in het monster aan. Een gedetailleerde beschrijving van de procedure voor het formuleren van PHA is uiteengezet in de instructies die aan de voorbereidingsset zijn gehecht (Scientific-Production Association "Rostepidkompleks", Rostov aan de Don).

De Rotatest-kit is gebaseerd op omgekeerde passieve hemagglutinatie en is ontworpen om rotavirus in de feces te detecteren en antilichamen tegen rotavirus in bloedsera te detecteren.

6.3.6. Methode van immunocytochemische detectie van rotavirus

De methode is gebaseerd op de immunochemische bepaling van viraal antigeen gesynthetiseerd in cellen als een gevolg van hun infectie met een virusbevattend materiaal.

Het voordeel van de methode vergeleken met ELISA is een hogere gevoeligheid, evenals het vermogen om de infectiviteit van het testmonster te bepalen en te kwantificeren.

Staging van het experiment: getransplanteerde cellen van de nier van een groene aap in een concentratie van 3 tot 10 cellen / ml maken 0,2 ml in de putjes van panelen met een vlakke bodem en incuberen bij 37 ° C (24 tot 48 uur). De cellen worden vervolgens met Eagle-MEM-medium gewassen. Het testmateriaal wordt verdund in Eagle-MEM-medium, 1 uur geactiveerd bij 37 ° C in aanwezigheid van 10 μg / ml trypsine en toegevoegd in 0,1 ml in ten minste 4 putjes. Positieve controles zijn de putjes waarin het materiaal waarvan bekend is dat het rotavirus bevat, is ingebracht. Negatieve controles: putjes met niet-geïnfecteerde cellen en wells, waarin materiaal wordt geïntroduceerd dat vergelijkbaar is met de test, maar geen rotavirussen bevat. Adsorptie wordt gedurende 1 uur bij 37 ° C uitgevoerd, vervolgens wordt het medium verwijderd, de cellen worden met Eagle-MEM-medium gewassen. Voeg 0,2 ml Eagle-MEM-medium met 1 μg / ml trypsine toe aan de putjes en incubeer 48 uur bij 37 ° C.

Cellen worden twee keer gewassen met zoutoplossing en gefixeerd met koud (-20 °) 85% aceton, 2 uur geïncubeerd bij -20 ° C, daarna wordt aceton verwijderd. Het paneel wordt driemaal gewassen met PBS dat 0,05% Tween 20 (PBS-T) bevat. 0,1 ml verdund 1: 1000 in PBS-T-immuun anti-rotavirusserum tegen rabiës wordt aan de putjes toegevoegd. Incubeer gedurende 2 uur bij 37 ° C. Na het wassen van het paneel wordt 0,1 ml van een peroxidase-gelabeld anti-IgG konijn antilichaam (commercieel preparaat) aan de putjes in een putje toegevoegd, in een concentratie van 2 μg / ml door het gehalte aan peroxidase in PBS met 1% BSA en 1,5 uur bij 37 ° C geïncubeerd C.

Het paneel wordt 2 keer gewassen met PBS-T en 1 maal met 0,05 M acetaatbuffer, pH 5,0. 0,1 ml van een vers bereide oplossing van peroxidasesubstraat bevattende 10 ml acetaatbuffer / 4 mg 3-amino-9-ethylcarbazool (AEC) opgelost in 0,5 ml aceton en 0,01 ml 33% waterstofperoxide wordt aan de putjes toegevoegd. (Let op! Werken met AEC vereist voorzichtigheid). Incubeer gedurende 30-40 minuten. in het donker op kamertemperatuur. De reactie wordt gestopt door het paneel te wassen met gedestilleerd water.

De verwerking van de reactie wordt uitgevoerd onder een lichtmicroscoop met een kleine vergroting. Negatieve controleputjes mogen geen gekleurde cellen bevatten. Lokale clusters van gekleurde cellen zijn foci van virale infectie.

6.3.7. Immunofluorescentiemethode

Om het rotavirus-antigeen te identificeren met behulp van immunofluorescentie, wordt een cellijn 4647 gebruikt.Cellen worden gegroeid op dekglaasjes of dia's ingesloten in penicillineflesjes of buizen. De geïnfecteerde kweek wordt gedurende 24 tot 48 uur bij 37 ° C geïncubeerd, waarna de glazen uit de flesjes worden verwijderd, gewassen in 0,15 M zoutoplossing met de toevoeging van fosfaatbuffer bij pH 7,2, gespoeld met gedestilleerd water en aan de lucht gedroogd. Vervolgens worden de bereidingen gefixeerd in twee verschuivingen (10 minuten elk) van chemisch zuiver aceton gekoeld tot 4 ° C.

De preparaten worden behandeld via een indirecte methode in een vochtige kamer. Een druppel immuun rotavirus konijnenserum wordt op de kweekcellen aangebracht en gedurende 30 minuten geïncubeerd. bij 37 ° C worden de geneesmiddelen driemaal gewassen in de FSB en wordt overtollig vocht verwijderd. Natte preparaten worden gekleurd met een mengsel van gelijke volumes anti-FITC-conjugaat en runderalbumine, gemerkt met rhodamine en 30 minuten geïncubeerd. bij 37 ° C Na driemaal wassen in de FSB worden de preparaten aan de lucht gedroogd. Om niet-specifieke fluorescentie te elimineren, wordt antiviraal serum geabsorbeerd voorafgaand aan gebruik met een homogenaat van normale celkweek en het FITC-conjugaat wordt behandeld met geactiveerde koolstof volgens standaardmethoden.

De volgende controles worden gebruikt als verplichte controles: preparaten van niet-geïnfecteerde culturen die op vergelijkbare wijze zijn behandeld en preparaten van geïnfecteerde culturen die zijn behandeld in de eerste fase van normaal en heteroloog antiviraal serum van dezelfde soort als het immuunserum voor rotavirus.

In het geval van positieve resultaten wordt een duidelijke felgroene fluorescentie waargenomen in het cytoplasma van de cellen.

6.4. Elektroforeotyperingsmethode van rotavirussen

De methode is gebaseerd op de identificatie van rotavirussen met behulp van polyacrylamidegelelektroforese van virale genome RNA-segmenten. De methode maakt differentiatie van rotavirusstammen mogelijk op basis van verschillen in de elektroforetische mobiliteit van individuele RNA-segmenten van verschillende isolaten en wordt daarom veel gebruikt in epidemiologische studies. De methode vereist geen pre-cultivatie van isolaten, heeft een hoge gevoeligheid en absolute specificiteit.

De methode is van bijzonder belang voor epidemiologen bij het onderzoek naar groep ziekten van uitbraken van rotavirus-infectie.

Het kan worden uitgevoerd op basis van laboratoria die zijn uitgerust met een elektroforese-apparaat.

Voor de analyse is 0,2 - 0,5 ml van 10 - 20% fecale suspensie voldoende. De suspensies worden behandeld met freon 113 en geïncubeerd met pronase (0,2 mg / ml, 15 minuten) in de aanwezigheid van natriumdodecylsulfaat (1%) en natriumethyleendiaminetetraacetaat (0,001 M). Na toevoeging van natriumacetaat (0,3 M) wordt het RNA gedeprotiniseerd met een mengsel van fenol: chloroform-isoamylalcohol en geprecipiteerd met 2,5 volumes ethanol (18 uur bij -20 ° C of 2 uur bij -70 ° C). Het precipitaat wordt verzameld door centrifugatie, opgelost in water en dissociatiebuffer wordt toegevoegd. Elektroforese wordt uitgevoerd volgens de methode van Laemmli in platen van 10% gel. Zilvernitraat (0,011 M) wordt meestal gebruikt om RNA in een gel te kleuren. Na de procedure van manifestatie in de gel zijn 11 banden RNA zichtbaar, overeenkomend met het rotavirus genomische segment.

6.5. Bepaling van klasse M-immunoglobuline in serum

een patiënt met rotavirusinfectie door de vaste-fase-methode

coagglutinatiereacties (TRCA)

In dit geval wordt het principe van de coagglutinatiereactie in de vaste fase (zie 4.3.4) gebruikt bij de modificatie: voor sensibilisatie van de paneelputjes gebruikt u 0.1 ml commercieel lammonospecifiek serum tegen menselijk IgM, in een verdunning van 1: 1000. Panelen worden gedurende 2-4 uur bij 37 ° C geïncubeerd. Vervolgens worden de putjes gewassen met FSBT, gevuld met 3% gelatineoplossing en 30 minuten bij 37 ° C laten staan. De putjes wasten FSBT en maakten 0,05 ml van de bestudeerde, evenals opzettelijk positieve en negatieve sera, verdund 1: 100 FSBT (2 gaten voor elk serum). Bij het bepalen van de antilichaamtiter worden dubbele verdunningen van de geteste monsters onderzocht (1:10 - 1: 1280). De panelen worden gedurende 2 uur bij 37 ° C geïncubeerd en na het wassen worden 0,05 ml diagnosticum en controlereagens in de gepaarde putjes ingebracht. De reactie wordt na 1 - 2 uur in aanmerking genomen (zie hierboven 4.3.4).

Hetzelfde principe, gemodificeerd door TRCA, wordt gebruikt om IgA- en IgG-antilichamen voor rotavirusinfectie te testen, evenals in de analyse van colostrum en melk voor lactoglobulines.

De methode voor het bepalen van klasse M immunoglobuline in het serum van de patiënt wordt gebruikt voor zowel vroege diagnose van manifeste vormen en hun differentiële diagnose met asymptomatische vormen van rotavirus-infectie.

7. Anti-epidemische maatregelen

Elk geval van een acute darminfectie veroorzaakt door rotavirussen, vooral kinderen in het eerste levensjaar, evenals kinderen die naar de kleuterscholen gaan, heeft een zorgvuldige epidemiologische analyse nodig om de bron, de belangrijkste manieren en factoren van overdracht te identificeren met het oog op tijdige implementatie van anti-epidemische maatregelen. bij de uitbraak.

Maatregelen gericht op het identificeren en neutraliseren van de bron van infectie. Detectie van patiënten die verdacht zijn van de ziekte wordt uitgevoerd door artsen van alle gezondheidsinstellingen: tijdens poliklinische bezoeken, huisbezoeken, medische onderzoeken van kinderen in instellingen, ziekenhuizen, enz. De geïdentificeerde patiënten zijn geïsoleerd van kindergroepen. Medische observatie en behandeling van patiënten kan thuis of in het ziekenhuis worden uitgevoerd. Kinderen die worden opgevangen in kinderinstellingen die worden ontslagen uit het ziekenhuis of die een thuisbehandeling met een negatieve laboratoriumtest hebben voltooid, worden toegelaten tot kindergroepen op basis van een kinderartscertificaat. Kinderen die WG hebben gehad en rotavirussen (of rotavirus-antigeen) blijven uitscheiden met uitwerpselen zonder klinische manifestaties van infectie, kunnen worden toegelaten tot kleuterscholen en kleuterschoolgroepen van kleuterscholen - kleuterscholen onder voorbehoud van de organisatie van continue medische observatie en herhaald laboratoriumonderzoek in 2 - 3 weken vanaf het begin van de ziekte of virusisolatie.

Epidemiologisch onderzoek van familiehaarden van patiënten met FG wordt uitgevoerd met de ziekte van kinderen jonger dan 2 jaar en volwassenen van het aantal verordende contingenten. De epidemioloog gaat met een onderzoek naar de kinderinstelling als er herhaalde gevallen van niet-bacteriële gastro-enteritis zijn.

Medische observatie van kinderen die communiceren met patiënten wordt uitgevoerd binnen vijf dagen na de datum van isolatie van de laatste zieke persoon.

Laboratoriumtests voor rotavirussen (antigeen) van kinderen en volwassenen die met patiënten hebben gecommuniceerd, zowel in het gezin als in georganiseerde groepen, worden uitgevoerd in opdracht van de infectioloog en de epidemioloog als er indicaties zijn (voorkomen in het gezin of in het kinderteam van herhaalde aandoeningen OKI met een vergelijkbare kliniek), grove schending van het sanitaire en hygiënische regime, de aanwezigheid bij de uitbraak van werknemers van voedingsbedrijven en personen die met hen gelijkgesteld zijn, enz.). Het verplichte laboratoriumonderzoek is afhankelijk van de moeder van een ziek kind in het eerste levensjaar. Personen bij wie rotavirussen (antigeen) in de ontlasting worden aangetroffen, worden onderworpen aan grondig klinisch onderzoek door een specialist in besmettelijke ziekten. Bij afwezigheid van klinische manifestaties van de ziekte zijn kinderen en werknemers van het team niet geïsoleerd.

Medewerkers van voedselbedrijven, waterdiensten, etc. op het moment van opnieuw laboratoriumonderzoek en medisch toezicht worden er binnen de faciliteit gewerkt. Herhaald laboratoriumonderzoek van personen die rotavirussen (antigeen) uitscheiden met feces, wordt uitgevoerd volgens het voorschrift van de infectioloog en de epidemioloog met een interval van 5-7 dagen, met behulp van een uitgebreid laboratoriumonderzoek.

Als groepsziekten voorkomen in kinderinrichtingen, worden quarantainemaatregelen uitgevoerd binnen 5 dagen vanaf het moment van isolatie van de laatste patiënt.

De instellingen verrichten regelmatig sanitaire en educatieve activiteiten gericht op het voorkomen van rotavirusinfecties.

Maatregelen gericht op het verbreken van het mechanisme van transmissie van infectie.

Studies hebben na 15 minuten een schadelijk effect op rotavirussen bij +70 ° C vastgesteld; bij blootstelling aan ultraviolette straling worden rotavirussen ook na 15 minuten geïnactiveerd.

In termen van hun resistentie tegen de werking van veel gebruikte ontsmettingsmiddelen, bevinden rotavirussen zich dicht bij enterovirussen en hepatitis A. Daarom is het raadzaam in de centra van de rotavirusinfectie en in ziekenhuizen waar er patiënten zijn, desinfectiemaatregelen uit te voeren volgens de regimes en de middelen te gebruiken die worden aanbevolen voor virale hepatitis A- en enterovirusinfecties (aanhangsel N 4 bij de Beschikking van het Ministerie van Volksgezondheid van de USSR N 752 van 07/08/81 en de Orde van het Ministerie van Volksgezondheid van de USSR N 916 van 08/04/83). Bijzondere aandacht moet worden besteed aan de juiste bediening van de handen van personen die de kinderen bedienen, evenals tepels, speelgoed, schalen en andere items voor patiëntenzorg.

Regelmatige bestraling met ultraviolette straling wordt aanbevolen. Ultraviolette straling wordt meestal uitgevoerd met behulp van bestralers - OBN-150 op 30 kubieke meter. m kamers, OBP-300 60 cu. m kamers en anderen. Niet-afgeschermde feeds ingesteld op 1 - 1,5 W per 1 cu. m kamers in afwezigheid van mensen (om schade aan de slijmvliezen te voorkomen), afgeschermd - met een snelheid van 2 - 2,5 W per 1 cu. m, kan bestraling worden uitgevoerd in de aanwezigheid van mensen. Desinfectietijd - 30 - 40 minuten. Luchtbestraling moet worden uitgevoerd na het schoonmaken van de kamer, het vervangen van beddengoed en ander werk dat verband houdt met de vorming van stofaerosol.

In gespecialiseerde afdelingen van het ziekenhuis moeten medewerkers ademhalingsmaskers dragen.

De organisatie van sanitaire en hygiënische maatregelen gericht op het voorkomen van rotavirusinfectie wordt uitgevoerd in overeenstemming met de huidige instructies en aanbevelingen voor andere infecties met het fecaal-orale mechanisme van de verspreiding van het pathogeen.

Een van de effectieve maatregelen om rotavirusinfecties bij pasgeborenen te voorkomen, is hun borstvoeding.

Specifieke preventie van rotavirus-infectie wordt niet uitgevoerd.